鱼病镜检与显微镜的运用方法：镜检是诊断鱼病的重要方法之一

镜检，即显微镜检讨是诊断鱼病的主要方法之一。
有些鱼类病原体肉眼看不清或根本看不见，必须借助于显微镜、解剖镜或放大镜来诊断。
如白头白嘴病是由细菌引起的，其症状是头、嘴发白，但又每每与车轮虫病并发。

而患车轮虫病的病鱼中，有时也会有个别病鱼头部或嘴部涌现轻微的灰白征象，随意马虎被误认为是白头白嘴病。
通过镜检，就能作出精确的诊断。

显微镜是由一个透镜或几个透镜的组合构成的一种光学仪器。
是人类进入原子时期的标志。
用于放大眇小物体成为人的肉眼所能看到的仪器。
显微镜的种类有很多，常见的有：光学显微镜、电子显微镜、探针显微镜等。
我们普通人平常用的大多是光学显微镜。

一、显微镜的布局

1.物镜

该镜头下端靠近被检物体，为显微镜上的紧张装置。
由多块透镜组成。
一样平常显微镜具有3个-4个物镜，分成干燥系和油镜两组，干燥系又按放大倍数分为低倍镜和高倍镜。
各物镜放大率由其形状辨认，镜头长度越大，镜片口径越小，放大倍数愈大；反之，放大倍数小。
油镜头的下缘，一样平常刻有一圈黑线。
此外，各物镜上都刻有放大倍数、孔径数等标志

2.目镜

目镜和镜检者的眼睛靠近。
目镜由两块透镜组成，其上刻有倍数。
为便于指出物象，常在镜中装玄色细丝一条，作为指针。

3.聚光器

聚光器位于载物台下方的次台上，由数个透镜组成。
能高下移动，调节并集聚由光源供应的光芒，使集中于载物玻片上。

4.光源

光源供应不雅观察所需光芒，装在显微镜的最下方。

5.镜臂

镜臂在镜筒后面，便于显微镜搬移，并作为将镜筒倾斜时的握持部。

6.底座

显微镜的底座用以支持全镜，呈马蹄形。

7.载物台

在物镜下方，呈方形或圆形，用以载放被检物体。
中心有孔，可以透光。
台上装有一弹簧夹，镜检时可以固定标本片。
有的载物台上装有载物台调度旋钮，捻转旋钮，能使标本前后旁边移动。

8.光圈

在聚光器下方，可以任意开闭，用以调节射入集光芒的多寡。

9.电源和亮度调节旋钮

用于开启光源和调节光源的亮度。

10.粗准焦螺旋和细准焦螺旋

粗准焦螺旋可使载物台较大间隔地升降。
细准焦螺旋可以精确地调节间隔。

二、显微镜的利用方法

（一)调光

(1)镜检时身体要正对实验台，采纳端正的姿态，调度两个目镜之间的间隔与不雅观测者瞳距符合，两眼自然睁开，同时左手调节焦距，使物像清晰并移动标本视野，右手记录、绘图。
将低倍物镜转至镜筒下方与镜筒成一贯线。
镜检时载物台不可倾斜，由于当载物台倾斜时，液体或油易流出，既破坏了标本，又污染载物台，也影响检讨结果。

(2)利用自然光源镜检时，最好用朝北的光源，不宜采取直射阳光；利用人工光源时，用日光灯的光源。
迁徙改变底部光源或拨动反光镜，调节视野亮度。
反光镜有平、凹两面，光源强时用平面，较暗时用凹面，须要强光时，将聚光器提高，光圈放大；须要弱光时，将聚光器降落，或光圈适当缩小。

(3)将待不雅观察的标本置载物台上，载物台上有固定的装置固定标本。
通过载物台调节旋钮将标本移至镜筒下方。
迁徙改变粗准焦螺旋使镜筒低落至物镜 镜靠近标本。
于迁徙改变粗准焦螺旋的同时，需俯身在镜旁仔细不雅观察物镜与标本之间的间隔。

(4)调节目镜之间间隔，双眼分别于左、右目镜中不雅观察，待双眼视野重合，同时左手迁徙改变粗准焦螺旋，使镜筒垂垂上升以调节焦距，使视野内的物像看到时即停，再调细准焦螺旋，至标本清晰为止。

(二)物镜的利用

显微镜一样平常具有三个物镜，即低倍、高倍及油镜，固定于物镜转换盘孔中。
不雅观察标本时，利用低倍物镜，此时，视野较大，标本较易查出，但放大倍数较小(一样平常放大100倍)，较小的物体不易不雅观察其构造。
高倍物镜放大的倍数较大(一样平常放大400倍)，能不雅观察眇小的物体或构造。
油镜放大倍数可达1000倍，用来不雅观察细菌。
普通人利用低倍物镜即可。

(三)低倍、高倍、油镜头的识别

(1)标明放大倍数10、40 、100 x，或10/0.25、40/0.65、 100/1.30。

(2)低倍镜最短，高倍镜较长，油镜最长。

(3)镜头前面的镜孔低倍镜最大，高倍镜较大，油镜最小。

(4)油镜头上常刻有玄色环圈，或“Oil"或“油”字

(四)低倍镜换高倍镜的利用方法

(1)光芒调好后，捻转载物台调节旋钮探求须要不雅观察的标本。

(2)如标本的体积较小，不能清楚查看其布局因而不能确认时，则将标本移至视野中心，再旋转高倍物镜于镜筒下方。

(3)旋转细准焦螺旋至物象清晰为止。

(4)调节聚光器及光圈，使视野内的物象达到最清晰的程度。

(五)油镜的利用方法

(1)将光芒调至最强程度(聚光器提高，光圈全部开放，亮度调节旋钮或光源放至最大）。

(2)将标本固定在载物台上，先把低倍镜调至视野最亮，并找到标本视野的适当位置，然后才能换用油镜。

(3)迁徙改变粗准焦螺旋使镜筒上升，滴喷鼻香柏油1小滴(不要过多，不要涂开)于物镜正下方标本上。

(4)迁徙改变物镜转换盘，使油镜头于镜筒下方。

(5)俯身镜旁侧面，在肉眼的不雅观察下，迁徙改变粗准焦螺旋使油镜头垂垂低落浸入喷鼻香柏油内，轻轻打仗玻片为止。
但勿使两者相碰，防止损伤镜头或玻片。

(6)逐步迁徙改变粗准焦螺旋，使油镜头垂垂上升至见到标本的物象为止。

(7)迁徙改变细准焦螺旋，使视野物象达到最清晰的程度。

(8)左手垂垂移动载物台调节旋钮，并迁徙改变细准焦螺旋以不雅观察标本。

(9)标本不雅观察完毕后，迁徙改变粗准焦螺旋将镜筒升起，取下标本玻片。
立即用擦镜纸将镜头上的喷鼻香柏油擦净，再用干净的擦镜纸蘸少许二甲苯擦拭镜头，末了用干净的擦镜纸将镜头上的二甲苯擦去。
把稳在擦镜纸擦拭时，哀求顺着一个方向旋转擦拭，不能两个方向来回擦。

(六)不雅观察

初学者应先用低倍镜不雅观察，这是由于低倍镜视野的实际范围最大，易于创造目的物，将标本玻片放在载物台上(把稳标本朝上)，并使标本位于物镜的正下方，迁徙改变粗准焦螺旋，同时从侧面不雅观察，待物镜低落到标本约0.5厘米时，开始由目镜不雅观察，同时用粗准焦螺旋升起镜筒，直到涌现物象后，改用细准焦螺旋，高下微微迁徙改变，仔细调节焦距，直至末了得到清晰的物象为止。
如此时视野里所不雅观察到的部位不理想时，可利用载物台调节旋钮将最适宜的部位移动到视野中心。

由低倍镜转换到高倍镜时，一定要从侧面注目，以防低倍镜未对好焦距而造成镜头与玻片相撞，其余要用手指捏住转换器下面的金属盘使之旋转，而不得用手指捏住物镜来迁徙改变，否则长期利用后，会使光轴歪斜。
调节光圈和聚光镜，使亮度适中，再仔细迁徙改变细准焦螺旋，调节焦距，得到清晰物象。

细菌或其他标本的细微构造，都须要用油镜不雅观察，由于油镜的事情间隔很短(0.19毫米旁边)，故利用时必须特殊小心。
在低倍镜找到要不雅观察的部位往后，将镜筒升高，在标本上加一滴喷鼻香柏油，转换镜头，从侧面注目，用粗准焦螺旋将镜筒小心低落，使油镜浸入油滴，直到险些与标本打仗为止(把稳切勿压在标本上，以免压碎玻片，乃至破坏油镜镜头)。
从目镜不雅观察，先用粗准焦螺旋垂垂升起(只准上升镜筒，不能向下调节)，当视野中有模糊的标本物象时，改用细准焦螺旋调节，直到标本物象清晰为止，如迁徙改变粗准焦螺旋已使镜头离开油镜，应重新调节，直至调到看清物象为止。

三、鱼体镜检的精确操作

用显微镜、解剖镜、放大镜对鱼病进行检讨，简称镜检。
镜检是在鱼病情形比较繁芜，仅凭肉眼检讨原则上是不能作出精确诊断时而开展的更进一步的检讨事情。
在一样平常情形下，鱼病每每错综繁芜，很多病原体十分眇小，有必要进行镜检。

镜检的方法是将从病变部位取少量的组织或粘液置于载玻片上，如是体表和鳃的组织或粘液，应加上少量普通清洁水或生理盐水；是内脏组织则用生理盐水或清洁水，然后盖上盖玻片，并稍加压平，于显微镜下进行不雅观察，先用低倍镜检讨，当创造有虫体布局看不准时，再换中倍镜或高倍镜检讨。

玻片从左到右，移下一小格，再从右往左，自上而下周而复始地移动，直至全体玻片看完，记下寄生虫的种类和数量。
少量寄生虫并不引起鱼病，但若随意在一个玻片上不雅观察3个视野记数，均匀每个视野有20个旁边，就应引起把稳。

总之，在全体检讨过程中，应把检讨到的情形，结合鱼病盛行时令、各阶段发病规律进行剖析比较，找出其缘故原由，作出诊断，然后根据各种病的防治方法，对症下药，及时总结。

四、检讨时应把稳的事变：

1.用活的病鱼或刚去世的病鱼。
迅速送到实验室进行检讨。
因韶光稍长，鱼体糜烂就很难精确论断。

2.取样时要保持鱼体湿润。
因鱼体干燥后，病鱼的症状也会变得不明显。
因此，应将病鱼装在带有原喂养水的桶或盆里拿出检讨。

五、检讨方法

（1）载玻片法

取下一小块病灶组织或一小滴内含物，放在干净的载玻片上，滴入一小滴净水或盐水，盖上盖玻片，轻轻地压平，先在低倍显微镜下检讨，分辨不清或可疑的可再用高倍镜检讨。

（2）玻片压缩法

用两片厚度约为3～4毫米，大小约612厘米的玻片，先将要检讨的组织或者是器官的一部分以及粘液等，放在个中一片玻片上，滴上适量的净水或生理盐水，用另一片玻片将其压成透明的薄层，即可放到解剖镜或低倍显微镜下检讨。

六、镜检该当重点检讨的组织器官

鱼的各个组织器官、血液都可能有病原体存在，但在生产实践中，特殊该当重点检讨的部位是粘液、鳍条、鳃、肠胃、肝脏等部位。

（1）粘液

在鱼的体表粘液中，每每有许多肉眼看不见的病原体，如颤动隐鞭虫、口丝虫、车轮虫以及吸虫囊蚴等，粘孢子虫和小瓜虫的孢囊肉眼也不易区分。
在检讨时，先用解剖刀刮取鱼体表的粘液，然后按照镜检方法将粘液放到显微镜或解剖镜下不雅观察。

（2）鳃

用剪刀从旁边鳃各剪取第一鳃两端和中间三个点的鳃组织，放在载玻片上，滴入适量的净水，盖上盖玻片在显微镜下不雅观察；然后再刮取鳃片上的粘液或可疑物，同样按上述方法进行检讨。
可创造鳃隐鞭虫、波豆虫、车轮虫、黏孢子虫、肤孢虫、斜管虫、小瓜子虫、杯体虫、毛管虫、指环虫等寄生虫。
鱼的鳃是特殊随意马虎被病原体侵袭寄生的部位，取鳃组织时，最好从每一边鳃的第一片鳃片靠近两端的位置剪取一小块，寄生虫大多在鳃小片的这两个位置上寄生。

检讨粘细菌可取鳃糜烂处阁下的组织，取下后放载玻片上，加净水静置10—15分钟后检讨(由于粘细菌离开寄主后会聚拢在一起)，随意马虎看到粘细菌。

（3）鼻腔

用吸管吸取少许净水注入鼻孔中，再用镊子或微吸管从鼻腔内取少许内含物或将液体吸出，放入培养皿中(要多吸几次)，或置于显微镜下检讨，用低倍显微镜或解剖镜不雅观察。
可创造黏孢子虫、车轮虫等原生动物。

（4）血液

从鳃动脉或心脏取血。
血液镜检可以创造锥体虫等原生动物寄生虫。

（5）口腔

用镊子刮取高下颚的粘液在显微镜下检讨。
若是检讨白头白嘴病，刮下吻部周围的粘液也要过10—15分钟后再不雅观察。

（6）眼

用弯头镊取出鱼眼睛，放于玻片上，剖开巩膜，释出玻璃体和水晶体，在低倍显微镜下或解剖镜下检讨，可创造双穴吸虫的囊蚴和黏孢子虫等。

（7）体腔（腹腔）

打开体腔，剖开鱼体，取出所有内脏后用清洁水或生理盐水自上而下冲洗腹腔，用平皿艳服冲洗液，稍加搅动，倒去上层净水，下沉水与沉淤物用吸管吸到载玻片上，逐次检讨。
创造有白点，用解剖镜或显微镜检讨，可创造黏孢子虫、微孢子虫、绦虫等成虫和囊蚴。

（8）肌肉

剥去鱼体皮肤后，先在前、中、后等部分取一小片肌肉放在载玻片上，盖上盖玻片，轻轻压平，在显微镜下不雅观察，再用压缩法检讨，可创造黏孢子虫、复殖吸虫、绦虫和线虫等幼虫。

（9）肠胃

检讨鱼的肠胃，首先应把肠道外壁上所有的脂肪组织只管即便去除干净，否则不易进行不雅观察。
目检肠道形状，若肠道外壁上有许多小白点，常日是粘孢子虫或微孢子虫的孢囊。
肉眼检讨完后，一样平常是将肠道分为前肠、中肠和后肠三段，分别进行检讨。
用尖剪在与肠平行的方向剪开一个小切口，用镊子从切口取一小滴内含物放载玻片上。
滴上一小滴生理盐水，盖上盖玻片，压片镜检，可创造鞭毛虫，变形虫、黏孢子虫、微孢子虫、球虫和纤毛虫等原生动物。
六鞭毛虫、变形虫和肠袋虫一样平常寄生在后肠近肛门3～7厘米处，而复殖吸虫、绦虫、线虫和棘头虫等常日在胃、前肠或中肠寄生。

检讨时除了把稳创造较大型的寄生虫外，还应把稳肠内壁上有无白色点状物或瘤状物，有无溃烂发红发紫的征象。
如果有小白点，压破其孢囊，每每可以看到大量的粘孢子虫，有时也会是微孢子虫。
青鱼肠里溃烂或有白色瘤状物，每每是球虫的大量寄生。
如果发红发紫，则一样平常是细菌性肠炎。

（10）肝脏

检讨鱼的肝脏，先肉眼不雅观察肝脏的颜色有无变革，有无溃烂、病变、白色和肿瘤等。
在肝的表面，有时可创造复殖吸虫的孢囊或虫体，有的则有粘孢子虫、微孢子虫或球虫形成的孢囊的小白点。
然后取少许肝组织，放在载玻片上，盖上盖玻片，轻轻压平，先在低倍镜下不雅观察，然后再用高倍镜不雅观察，常日在病鱼肝脏上可创造粘孢子虫，微孢子虫等的孢子或胞囊，有时还有吸虫的囊蚴。

（11）胆囊

鱼的胆囊壁和胆汁，除用载玻片法在显微镜下检讨外，还要用压展法或放在培养皿里用解剖镜或低倍显微镜不雅观察。
胆囊内可创造六鞭毛虫、黏孢子虫、微孢子虫、复殖吸虫和绦虫幼虫等。

取胆囊时要特殊小心，切勿弄破，取出后放培养皿中，目检后取一部分胆囊壁放载玻片上，盖上盖玻片，压平，放显微镜下不雅观察。
检讨胆汁时用吸管吸取胆汁，在镜下作载玻片法检讨。

（12）鳔

检讨鱼鳔用载玻片法和压展法同时检讨，可创造复殖吸虫、线虫、黏孢子虫及其胞囊。

七、镜下不雅观察病原体的计数方法

镜检时，除理解病原体的种类和对寄主的传染率(%)外，还要理解它们对寄主的传染强度，因而对每种病原体的数量要进行统计。

其方法与标准是：细菌：肠炎、烂鳃、蛀鳍、赤皮病、疖疮等按表现的症状，用笔墨描述。

真菌：水霉、鳃霉，按照对器官的比例大小，用笔墨和数字解释。
原生动物：这类病原体用肉眼难于不雅观察到，镜下不雅观察一样平常也不可能逐个数清，因而采取估计法以“+”来表示，“+”表示有，“++”表示多，“+++”表示很多。

个中：

鞭毛虫、变形虫和孢子虫的孢子，在高倍镜一个视野下有1—20个虫体记“+”号，20—5b个虫体记；“++”号，虫体51个以上记“+++”号，并注明因此孢子打算的。

纤毛虫、吸管虫庄低倍镜一个视野下有1—50个记“+”号，51—100个记“++”号，100个以上记“+++”号。

小瓜虫可按孢子虫的标准统计。

以上每—种统计数，都以任取放大同倍数的3个视野中不雅观察到虫体的均值表示。

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