“胶收受接收DNA”轻松拿捏
编辑：[db:作者] 时间：2024-08-25 04:08:25
一位好的科研事情者，必须有个好心态，五雷轰雷也不动声色，要不然心态随意马虎崩。说的有点夸年夜，实在各行各业都须要好心态，从容应对各种各样的结果。
试验操作一样，结果便是不一样，“神”一样的试验，本日存在、来日诰日存在、后天也可能存在，一次重复、两次重复……没结果。
一位小伙伴本操持割胶回收 DNA ，“咦，条带呢？明明刚才条带很清晰……”，这一节内容大略，放松一下。
在 琼脂糖凝胶电泳技能详细操作步骤和详解 一文中，我们得到了核酸电泳图谱，在电泳图谱中， 通过比较 DNA 片段的迁移间隔，与标准品进行对照，可以判断 DNA 片段的大小，从而得到目的 DNA 片段，如何分离出 DNA ？利用“回收DNA”试验进行回收。
一、割胶回收事理
DNA 经琼脂糖凝胶电泳后，切下要回收的含 DNA 的琼脂块，采取 DNA 胶回收试剂盒回收 DNA 。
琼脂糖凝胶块在凝胶溶胶液中被迅速熔化并开释出 DNA ， DNA 片断当选择性吸附到硅胶膜上，经 DNA漂洗液 洗涤去除残留在硅胶膜上的杂质和高浓度盐离子后，吸附到硅胶膜上的 DNA 片断经微量水或 DNA 洗脱液洗脱下来。该方法回收率高且不降解 DNA ，操作大略、快速、方便，纯化的 DNA 适宜于任何分子生物学操作（如酶切、克隆、测序等）。
1. 溶胶液： 溶解琼脂糖凝胶并保持 DNA 的稳定性。
溶胶液中常日含有 Tris-HCl （供应一个温和的 pH 环境，保护 DNA 不被降解）， EDTA （螯合金属离子如 Mg ⁺和 Ca ⁺，抑制核酸酶活性）， SDS 或 Tween-20 （溶解细胞膜和蛋白质，开释 DNA ）， NaCl ， -巯基乙醇等。
漂洗液中常日含有乙醇（沉淀DNA、去除杂质），缓冲盐（坚持pH），去污剂（除杂质），螯合剂（螯合金属离子）等。
漂洗 液中常日含有超纯水（溶解DNA），缓冲剂（坚持pH），螯合剂 （螯合金属离子 ） 等。
三、 DNA 胶回收详细步骤
1.核酸电泳： 琼脂糖凝胶电泳参照 琼脂糖凝胶电泳技能详细操作步骤和详解 干系内容。
3.添加溶胶液： 将琼脂块放在离心管内用 1mL 枪头捣碎，加入3倍体积的溶胶液 （如胶为 100mg ，则加 30 0L 溶胶液 ），颠倒混匀， 50-55℃ 水浴加热约 10min 至胶全熔。其间，需颠倒混匀三四次，以加速凝胶溶化。
胶溶韶光的是非克根据胶碎片大小确定，确保全熔即可。
溶胶时，如果溶胶液变为赤色（正常情形下为淡黄色），可向含有 DNA 的胶溶液中加入 10-30 L 3M 醋酸钠（pH5.2）将胶溶液调为淡黄色，否则将会影响 DNA 与吸附柱的结合，影响回收效率。DNA在溶胶液中。
4.添加漂洗液： 向吸附柱中加入 600L 漂洗液(利用前请先检讨是否已加入无水乙醇)， 12000rpm 离心 1 min ，弃废液，将吸附柱放入网络管中。
5.添加漂洗液： 向吸附柱中加入 600 L 漂洗液， 12000rpm 离心 1min ，弃废液，将吸附柱放入网络管中。
6.干燥： 12000rpm 离心 2min ，只管即便撤除漂洗液。将吸附柱敞口置于室温或 50 ℃ 培养箱中放置数分钟，目的是 将吸附柱中残余的漂洗液去除，防止漂洗液中的乙醇影响后续的实验。
7.添加洗脱液洗脱： 将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中心悬空滴加适量经 65℃ 水浴预热的洗脱液，室 温放置 2min，12000rpm 离心 1min 。
1.试验技巧
2.温度
本站所发布的文字与图片素材为非商业目的改编或整理，版权归原作者所有，如侵权或涉及违法，请联系我们删除，如需转载请保留原文地址：http://www.baanla.com/lz/zxsj/113466.html
下一篇：返回列表